Aislamiento de Acanthamoeba spp. en salas cerradas de un hospital de la provincia de Buenos Aires, Argentina / Isolation of Acanthamoeba spp. in closed rooms of a hospital in Buenos Aires province, Argentina

Resumen Las amebas de vida libre (AVL) son protozoos ubicuos con cuatro géneros patógenos para el ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, y Sappinia. Acanthamoeba puede actuar como reservorio de microorganismos (endosimbiontes), por lo cual, en medio hospitalario, implicaría un riesgo para la transmisión de bacterias, virus y hongos intranosocomiales. Se investigó la presencia de AVL, con énfasis en Acanthamoeba spp., en un hospital pediátrico de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se colectaron 22 muestras de lavamanos e incubadoras en salas de Neonatología y Terapia Intensiva, las que fueron cultivadas a 37 y 42 °C. Los aislados fueron identificados molecularmente. El 63,64% de las muestras presentaron Acanthamoeba spp. Esta investigación representa el primer estudio realizado en la Argentina sobre la detección de Acanthamoeba spp. en salas cerradas de un hospital. Su presencia es una señal de alarma y resulta un blanco útil para investigar posibles reservorios de microorganismos patógenos en ambientes hospitalarios.

Abstract Free-living amoebae (FLA) are ubiquitous protozoa with four pathogenic genera for humans: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, and Sappinia. Acanthamoeba can act as a reservoir of microorganisms (endosymbionts), for which reason, in a hospital environment, it would imply a risk for transmission of nosocomial bacteria, viruses and fungi. The presence of AVL, with emphasis on Acanthamoeba spp., was investigated in a pediatric hospital. Twenty-two samples were collected from sinks and incubators in Neonatology and Intensive Care rooms, which were cultured at 37 and 42 °C. The isolates found were molecularly identified. A total of 63.64% of the samples presented Acanthamoeba spp. This research represents the first study in Argentina on the detection of Acanthamoeba spp. in closed rooms of a hospital. Its presence is an alarm signal, and it is a useful target to investigate possible reservoirs of pathogenic microorganisms in hospital environments.

Resumo As amebas de vida livre (AVL) são protozoários ubíquos com quatro gêneros patogênicos para o ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, e Sappinia. Acanthamoeba pode atuar como um reservatório de microrganismos (endossimbiontes), e portanto, em um ambiente hospitalar, representaria um risco de transmissão de bactérias, vírus e fungos intra-nosocomiais. A presença de AVL, com em Acanthamoeba spp. em um hospital pediátrico da província de Buenos Aires, Argentina, foi investigada. Vinte e duas amostras foram coletadas em lavatórios e incubadoras em Salas de Neonatologia e Cuidados Intensivos, cultivadas a 37 e 42 °C. Os isolados foram identificadas molecularmente. Foram encontradas Acanthamoeba spp. em 63,64% das amostras. Esta investigação representa o primeiro estudo realizado na Argentina sobre a detecção de Acanthamoeba spp. em salas fechadas de um hospital. A sua presença é um sinal de alarme e um alvo para investigar possíveis reservatórios de microrganismos patogênicos em ambientes hospitalares.

Presencia de Acanthamoeba spp. en piscinas recreativas al aire libre de la ciudad de Córdoba, Argentina / Presence of Acanthamoeba spp. in outdoor recreational swimming pools in Córdoba city, Argentina / Presença de Acanthamoeba spp. em piscinas recreativas ao ar livre da cidade de Córdoba, Argentina

Resumen El objetivo del estudio fue determinar la presencia de Acanthamoeba spp. en piscinas de uso recreacional, al aire libre, de la ciudad de Córdoba, Argentina. Se recolectaron 30 muestras de agua correspondientes a un total de 10 piscinas. Estas se sembraron en agar no nutritivo en presencia de Escherichia coli en solución de Page. Luego de 72 horas de incubación a 37 °C, la identificación genérica se realizó mediante criterios morfológicos. La prueba de transformación amebo-flagelar se realizó para diferenciar amebas de vida libre que desarrollan trofozoítos flagelados, como Naegleria. Se midieron parámetros fisicoquímicos en cada una de las piscinas. Se identificó Acanthamoeba spp. en el 20% del total de las muestras. Las piscinas en las que se aisló este parásito presentaron niveles no detectables de cloro residual, pH moderadamente alcalino y temperatura templada. Este estudio demuestra la presencia de Acanthamoeba spp. en piscinas recreativas de Córdoba, lo que puede representar un potencial riesgo para la salud pública.

Abstract The aim of the study was to determine the presence of Acanthamoeba spp. in outdoor recreational pools, in Córdoba city, Argentina. Thirty water samples corresponding to a total of 10 pools were collected. These samples were sown on a non-nutritive agar in the presence of Escherichia coli in Pages's solution. After 72 hours of incubation at 37 °C, the generic identification was done based on morphological criteria. The amoebo-flagellate transformation test was performed to differentiate from genera that develop flagellated trophozoites, such as Naegleria. Physicochemical parameters were measured in each of the pools. Acanthamoeba spp. was identified in 20% of the samples. The pools, where this parasite was isolated, presented undetectable levels of residual chlorine, moderately alkaline pH and warm temperature. This study demonstrates the presence of Acanthamoeba spp. in recreational pools in Córdoba, which may represent a potential risk to public health.

Resumo O objetivo do estudo foi determinar a presença de Acanthamoeba spp. em piscinas para uso recreativo, ao ar livre, na cidade de Córdoba, Argentina. Foram coletadas 30 amostras de água correspondentes a um total de 10 piscinas. Elas foram semeadas em ágar não nutritivo na presença de Escherichia coli em solução de Page. Após 72 horas de incubação a 37 °C, a identificação genérica foi realizada utilizando critérios morfológicos. O teste de transformação amebo-flagelar foi realizado para diferenciar amebas de vida livre que desenvolvem trofozoítos flagelados, como Naegleria. Parâmetros físico-químicos foram medidos em cada uma das piscinas. Acanthamoeba spp. foi identificada em 20% do total das amostras. As piscinas onde este parasita foi isolado apresentaram níveis indetectáveis de cloro residual, pH moderadamente alcalino e temperatura temperada. Esse estudo demonstra a presença de Acanthamoeba spp. em piscinas recreativas de Córdoba, o que pode representar um risco potencial para a saúde pública.

Detection of Legionella pneumophila in water and biofilm samples by culture and molecular methods from man-made systems in São Paulo - Brazil

Legionella pneumophila is a pathogenic bacteria associated to aquatic habitat of natural and artificial environments. Clinical cases of legionellosis have been reported in Brazil but there is a lack of information about the incidence and concentration of this bacterium in environmental sources. Thus, the present study was designed to evaluate the occurrence of legionellae in São Paulo city, Brazil, using different methods of detection and identification. Sixty-seven water and biofilm samples from natural reservoirs and man-made systems were collected and analyzed for the presence of Legionella spp by culturing onto a selective medium, coculture in axenic free-living amoebae and direct fluorescent antibody (DFA) assay. Results showed that freshwater of reservoirs did not contain legionellae, Legionella pneumophila was isolated from man-made systems, with predominance of Legionella pneumophila serogroup 1 strains. Although there was no statistical difference among the proposed detection methods, the plate culture method yielded a higher number of L. pneumophila positive samples, followed by amoebic coculture procedure and direct fluorescent antibody assay. Results of PCR and sequencing reactions revealed that application of macrophage infectivity potentiator gene as a molecular marker was an important tool for the identification of environmental isolates of L. pneumophila. The agreement among the three detection methods-when all methods yielded similar results- and the prevalence of a single Legionella species in the sampled man-made systems could suggest that the occurrence of this bacterium had been influenced by the higher concentration of metallic ions dissociated in water of those systems than in natural reservoirs. Thus, the results of this study revealed that the water of man-made systems in Sao Paulo may serve as a reservoir for L. pneumophila and other microorganism, including free-living protozoans.

Legionella pneumophila é uma bactéria patogênica associada à habitats aquáticos de ambientes naturais e artificiais. Casos clínicos de legionelose têm sido descritos no Brasil, mas a incidência e concentração desta bactéria em fontes ambientais ainda são pouco conhecidas. Assim, o presente estudo foi desenvolvido para avaliar a ocorrência de bactérias do gênero Legionella na cidade de São Paulo, Brasil, utilizando diferentes métodos de isolamento e identificação. Sessenta e sete amostras de água e biofilme de reservatórios naturais e sistemas artificiais de climatização de ambientes interiores foram coletadas e analisadas quanto à presença de Legionella spp por métodos de cultivo em meio-de-cultura seletivo, cocultivo com amebas de vida livre axênicas e ensaios de imunofluorescência direta (IFD). Os resultados demonstraram que bactérias do gênero Legionella não foram detectadas em reservatórios naturais de água, Legionella pneumophila foi isolada de sistemas artificiais de climatização, com predominância de cepas de Legionella pneumophila sorogrupo 1. Apesar de não ter havido diferença estatística significante entre os métodos de detecção propostos, o método de cultivo em placa produziu o melhor resultado quanto ao número de amostras positivas para L. pneumophila, seguido do procedimento de cocultivo com amebas e ensaio de imunofluorescência direta. Os resultados das reações de PCR e sequenciamento revelaram que a aplicação do gene potencializador de infecção em macrófagos como marcador molecular foi um importante implemento na identificação de isolados ambientais de L. pneumophila. A concordância existente entre os três métodos de detecção - quando todos os métodos produziram resultados similares - e a prevalência de uma espécie de Legionella nos sistemas artificiais amostrados poderia sugerir que a ocorrência desta bactéria tenha sido influenciada pela maior concentração de íons metálicos dissociados na água daqueles sistemas do que...

Isolamento e identificação de amebas de vida livre potencialmente patogênicas em amostras de ambientes de hospital público da cidade de Porto Alegre, RS / Isolation and identification of potentially pathogenic free-living amoebae in samples from environments in a public hospital in the city of Porto Alegre, Rio Grande do Sul

Um estudo sobre a presença de amebas de vida livre em um hospital público foi desenvolvido na Cidade de Porto Alegre, RS. Poeira e biofilmes de 15 ambientes hospitalares, incluindo CTI, UTI pediátrica, cozinha, emergência, centro cirúrgico ambulatorial e centro cirúrgico, reservatórios de água, torneira e 6 bebedouros coletivos foram coletados mensalmente, de julho de 2004 a março de 2005, usando-se suabes estéreis, preparados para a pesquisa. As AVL foram isoladas em cultivo, utilizando-se meio de ágar não nutriente adicionado de Escherichia coli, mortas pelo calor. A identificação dos protozoários foi feita pela observação morfológica de cistos e trofozoítos, segundo critérios morfológicos de Page (1988). Das 135 amostras coletadas dos 15 ambientes estudados, 47 (35 por cento) foram positivas para AVL. Destas, 34 por cento apresentaram características morfológicas próprias do gênero Acanthamoeba.

A study on the presence of free-living amoebae in a public hospital was developed in the city of Porto Alegre, State of Rio Grande do Sul. Dust and biofilms were collected using sterile swabs that had been prepared for this study, from 15 hospital environments, including the intensive care center, pediatric intensive care unit, kitchen, emergency room, outpatient surgical center, clinical surgical center, water storage tanks, taps and six drinking fountains for general use, every month from July 2004 to March 2005. The FLAs were isolated by culturing, using non-nutrient agar medium with the addition of heat-killed Escherichia coli. The protozoa were identified by morphological observation of cysts and trophozoites, in accordance with Page's morphological criteria (1988). Among the 135 samples collected from the 15 environments, 47 (35 percent) were positive for FLAs. Of these, thirty-four percent presented morphological characteristics particular to the genus Acanthamoeba.

Frequência de amebas de vida livre em fezes de indivíduos de uma creche da cidade de São Paulo / Frequency free-living amebas in the feces of persons from a nursery in Säo Paulo city

A ocorrência de amebas de vida livre foi pesquisada em 90 amostras de fezes de indivíduos pertencentes a uma creche da cidade de São Paulo. As amostras foram semeadas em placas de Petri contendo ágar não nutriente, ou ágar não nutriente - sal, com um tapete de Ent.erobacter aerogenes, morto pelo calor. As placas foram incubadas a temperaturas de 28, 37 e 400 C, e observadas diariamente durante sete dias. A positividade foi de 22,71% em 66 crianças, e de 8,33% em 24 adultos. Foram isoladas 21 amostras do gênero Acanthamoeba, 4 de Naegleria, 1 de Echinamoeba, e 12 de amebídeos não identificados. Foram examinadas mais 3 amostras fecais de cada indivíduo com exame positivo, com intervalo de um mês entre as coletas. Amostras de Acanthamoeba sp. foram reisoladas em dois indivíduos, o que nos leva a supor que amebídeos estavam sendo por eles albergados, e não em simples trânsito intestinal (AU).